डी. यू. रियाझंतसेव्ह, ई. एम. चुडिनोवा, एल. यू. कोकाएवा, एस. एन. एलान्स्की, पी. एन. बालाबको, जी. एल. बेलोवा, एस. के. झाव्ह्रीव्ह
फायटोपाथोजेनिक फंगस कोलेटोट्रिचम कोकोड्समुळे बटाटे आणि टोमॅटोमध्ये अँथ्रॅकोनोझ आणि कंद ब्लॅक स्पॉट म्हणून ओळखले जाणारे धोकादायक रोग होतात. आकारिकीय वैशिष्ट्यांद्वारे, इतर सूक्ष्मजीवांमुळे होणा-या रोगांपेक्षा ते ओळखणे नेहमीच कठीण असते; हिरव्या टोमॅटोच्या फळांवर, रोग हा रोगविरोधी असू शकतो जो केवळ योग्य लाल फळांवर प्रकट होतो. रोगजनकांच्या त्वरित आणि अचूक निदानासाठी, रिअल-टाइम पीसीआर चाचणी प्रणाली दिली जाते. चाचणी प्रणाली विकसित करण्यासाठी, रशियाच्या वेगवेगळ्या प्रदेशात बटाटा कंदांपासून विभक्त 45 डिग्री सेल्सियस ग्लिसरॉल ट्रायफॉस्फेट डिहायड्रोजनेज जनुकाचा न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम निश्चित केला गेला.
जेनबँक डेटाबेसमध्ये उपलब्ध असलेल्या इतर प्रजातींच्या समान अनुक्रमांच्या प्राप्त केलेल्या निकालांच्या विश्लेषणाच्या आधारावर, प्रजाती-विशिष्ट प्राइमर आणि सी. कोकोडची तपासणी केली गेली. तयार केलेल्या चाचणी प्रणालीची विशिष्टता तपासण्यासाठी, टोमॅटो आणि बटाटा वनस्पतींशी संबंधित परजीवी आणि सॅप्रोट्रॉफिक बुरशीच्या 15 वेगवेगळ्या प्रजातींच्या शुद्ध संस्कृतीतून अलग ठेवलेले डीएनए (पीसीआर) केले गेले (फ्यूझेरियम ऑक्सिस्पोरम, एफ. व्हर्टिसिलियम, फोपोप्सिस फेलोली, अल्टेरानिया अल्टरनेटा, हेलमिंथोस्पोरियम सोलॅनोकोस्पोट्स) फेलीनस फेरूइनोव्ह्लूटीनस, स्टेम्फिलियम वेसिकेरियम, हेल्मिंथोस्पोरियम सोलानी, फोमोप्सिस फेजोली, नियोनेक्ट्रिया रॅडिकिकोला, राइझोक्टोनिया सोलानी, पेनिसिलियम एसपी., क्लेडोस्पोरियम फुलवम, सी. क्लेडोस्पोरिओइड्स). कोलेटोट्रिचम कोकोड डीएनएची उपस्थिती 20-27 च्या उंबरठा चक्रात निश्चित केली गेली होती, तर इतर प्रजाती 40 चक्रांनंतर शोधली गेली किंवा सापडली नाहीत. चाचणी प्रणाली विश्लेषित पीसीआर मिश्रणामध्ये 0.01 एनजी / मिमी 3 पेक्षा जास्त सी कोकोड डीएनए सांद्रता विश्वासार्हपणे शोधणे शक्य करते. विकसित चाचणी प्रणालीचा वापर करून, टोमॅटोच्या पानांमध्ये सी कोकोडची उपस्थिती, बुरशीजन्य रोगाच्या लक्षणांसह आणि रोगाच्या बाह्य लक्षणांशिवाय बटाटा कंदमध्ये आढळून आले. कोस्ट्रोमा, मॉस्को, कलुगा, निझनी नोव्हगोरोड प्रांतातील क्रास्नोदर टेरिटरी, कंद - दोन वेगवेगळ्या शेतात बुरशीजन्य संसर्गाची लक्षणे असलेली पाने गोळा केली गेली. सी. कोकोड डीएनए असलेले टोमॅटोचे एक पान क्रास्नोडार प्रदेशात आढळले; कोस्ट्रोमा, मॉस्को, कलुगा प्रदेशात वाढलेल्या कंदांच्या 5 नमुन्यांमध्ये या रोगजनकांच्या डीएनएची महत्त्वपूर्ण उपस्थिती आढळली.
परिचय
कोलेटोट्रिचम या जातीचे मशरूम अन्नधान्य, भाज्या, औषधी वनस्पती, बारमाही फळ आणि बोरासारखे बी असलेले लहान फळ प्रभावित करणारे धोकादायक फायटोपाथोजेन आहेत. या वंशाच्या सर्वव्यापी प्रजातींपैकी एक म्हणजे कोलेटोट्रिचम कोकोड्स (वॉलर).
ह्यूजेस अॅन्थ्रॅकोनस आणि बटाटे आणि टोमॅटोचा काळ्या डागांचा कारक आहे आणि त्यामुळे सोलानासी कुटुंबातील इतर अनेक वनस्पतींना आजार होतात. तण (दिल्लार्ड, 1992). सी. कोकोड्स वनस्पतीच्या सर्व भूमिगत भाग, स्टेम बेस, पाने आणि फळे संक्रमित करतात (अॅन्ड्रिव्हन एट अल. 1998; जॉन्सन, 1994). संक्रमित बटाटा कंदांच्या सालावर, अस्पष्टपणे स्पष्ट कडा असलेल्या राखाडी स्पॉट्सचा विकास साजरा केला जातो, ज्यावर स्पोरुलेशन आणि मायक्रोस्क्लेरोटियाचे काळे ठिपके स्पष्टपणे दिसतात. स्टोरेज दरम्यान, मऊ सामग्रीसह अल्सर कंदांच्या लगद्यामध्ये तयार होऊ शकतात, म्हणजे. हा रोग अॅन्थ्रॅकोनोझ टप्प्यात प्रवेश करतो, जो अत्यंत दुर्मिळ आहे.
त्याच वेळी, hन्थ्रॅकोन्सची लक्षणे (लहान काळ्या ठिपक्यांसह त्वचेचे अल्सर) टोमॅटोच्या फळांचे वैशिष्ट्य आहे. पानांवर, सी कोकोडची लक्षणे गडद तपकिरी रंगाचे स्पॉट्स म्हणून दिसतात, सामान्यत: पिवळ्या ऊतकांद्वारे (जॉनसन, 1994).
कंदांवर काळ्या डागांचा विकास त्यांचे स्वरूप खराब करतो, जे धुतलेले लाल-सोललेली बटाटे विकताना विशेषतः उच्चारला जातो. पील एक्सफोलीएशनमुळे जास्त बाष्पीभवन होते आणि स्टोरेज नष्ट होते (भूक, मॅकइन्टायर, १ 1979..) वनस्पतींच्या इतर अवयवांचे नुकसान झाल्यामुळे उत्पन्नाचे नुकसान होते, जे खुल्या व बंद दोन्ही ठिकाणी नमूद केले गेले (जॉन्सन, १ 1994 Ts;; ट्रेसर एट अल., १ 1999 2003)). सी. कोकोड्समुळे होणारे आजार रशियासह जगातील बहुतेक सर्व बटाटा उत्पादक प्रदेशांमध्ये सामान्य आहेत (लीसा, हिल्टन, 2018; बेलव एट अल, 1995). सी कोकोड्स विरूद्ध विद्यमान बुरशीनाशकांची अपुरी कार्यक्षमता आणि प्रतिरोधक वाणांच्या अभावामुळे (वाचन, लपवा, XNUMX) या रोगांचे नियंत्रण कठीण आहे.
सी. कोकोड्स इनोकुलम बियाणे कंद (रीड, हिड, 1988; जॉनसन एट अल., 1997), टोमॅटो बियाणे (बेन-डॅनियल एट अल., २०१०) मध्ये टिकू शकतात, वनस्पती मलबेवर मातीमध्ये बराच काळ टिकतात (डिलार्ड, 2010 ; डिलार्ड, कोब, 1990) आणि इन वीड्स (रेड, पेनीपाकर, 1993) बर्याच लेखकांच्या (वाचन, लपवा, 1987; बार्कडॉल, डेव्हिस, 1988; जॉन्सन एट अल., 1992; डिलार्ड, कोब, 1997) च्या कार्यांनी हे सिद्ध केले आहे की बटाटे आणि टोमॅटोमध्ये रोगाचा विकास मुख्यत्वे बियाणे आणि इनोकुलमच्या अस्तित्वावर अवलंबून असतो. माती. म्हणूनच, या रोगापासून होणारे नुकसान कमी करण्यासाठी, बियाणे बटाटा कंद आणि टोमॅटोच्या बियामध्ये साठवणीसाठी ठेवलेल्या बियाणे सामग्रीत, बुरशीच्या बुरशीचे प्रमाण (परिमाणवाचक) निदान करणे आवश्यक आहे. माती आणि वनस्पती सामग्रीतील मॉर्फोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स केवळ मायक्रोस्क्लेरोटियाच्या उपस्थितीमुळेच केले जाऊ शकतात, जे इतर प्रकारच्या बुरशींमध्ये देखील आढळतात.
कंदवरील लक्षणे हेलमिंथोस्पोरियम सोलानी या बुरशीमुळे उद्भवलेल्या चांदीच्या स्कॅबसारखेच असतात. शुद्ध संस्कृतीत कोलेटोट्रिचम कोकोड्स आणि हेल्मिंथोस्पोरियम सोलनीचे पृथक्करण करणे त्याऐवजी कठीण आहे आणि पौष्टिक माध्यमाच्या मंद वाढीमुळे बराच वेळ लागतो. कोलेटोट्रिचम कोकोड द्रुतपणे ओळखण्यासाठी, इन्स्ट्रूमेंटल डायग्नोस्टिक पद्धती वापरणे आवश्यक आहे. सर्वात सोयीची पद्धत म्हणजे पॉलिमरेज चेन रिएक्शन (पीसीआर) आणि त्यातील बदल - रिअल-टाइम पीसीआर. सध्या, आरडीएनएच्या आयटीएस 2002 क्षेत्रासाठी ब्रिटीश संशोधकांनी (कुलेन एट., २००२) विकसित केलेली चाचणी प्रणाली यूरोप आणि अमेरिकेत वापरली जाते. रशियन पृथक्करण (बेलोव एट अल, 1) च्या विश्लेषणामध्ये त्याचा उपयोग चांगला परिणाम दर्शविला आहे. तथापि, सी. कोकोड्स अत्यंत परिवर्तनशील आहेत आणि एकाच डीएनए अनुक्रमातून त्याचे शोध घेतल्यास चुकीचे नकारात्मक परिणाम होऊ शकतात. अधिक विश्वासार्ह निदानासाठी, अनेक प्रजाती-विशिष्ट डीएनए अनुक्रमांचे विश्लेषण करणे आवश्यक आहे, ज्याच्या संबंधात आपण ग्लाइसेराल्डिहाइड---फॉस्फेट डिहायड्रोजनेस जनुकच्या अनुक्रमे सी सी कोकोड्स ओळखण्यास अनुमती देणारी मूळ चाचणी प्रणाली विकसित केली आहे.
साहित्य आणि पद्धती
तयार केलेल्या चाचणी प्रणालींच्या कार्यक्षमतेचे आणि विशिष्टतेचे आकलन करण्यासाठी, आम्ही टोमॅटोची पाने आणि फळे, बटाटा कंद (तक्ता 15) च्या रोगट नमुने पासून लेखकांनी वेगळ्या बुरशीच्या 1 प्रजातींची शुद्ध संस्कृती वापरली. वेगळ्यापणासाठी, आम्ही बुरशीजन्य संसर्गाची लक्षणे असलेल्या वनस्पतींचे अवयव घेतले, बुश प्रति एक अवयव जास्त नाही.
सोललेली कंदातील एक तुकडा, टोमॅटोच्या फळाचा एक तुकडा आणि बाधित सूक्ष्मदर्शकाखाली एक प्रभावित पान ठेवण्यात आले ज्यानंतर मायसेलियम, बीजाणू किंवा ऊतकांचा तुकडा पेट्री डिशमध्ये धारदार विदारक सुईने आगर मध्यम (वर्ट अगर) मध्ये हस्तांतरित केला गेला. वेगळ्या चाचणी ट्यूबमध्ये ag डिग्री सेल्सियसवर अगर स्लंटवर ठेवलेले होते.
विश्लेषणासाठी हेतू असलेल्या बुरशीजन्य रोगांच्या लक्षणांसह टोमॅटोच्या पानांची उदाहरणे संग्रहानंतर (शेतात) 70% इथिल अल्कोहोलमध्ये ठेवली गेली ज्यात ते डीएनए अलगाव पर्यंत साठवले गेले. बटाटा कंद त्यांच्याकडून प्रयोगशाळेत सोलले गेले (2 × 1 सेमी तुकडा) आणि oz20 С fr येथे गोठवले गेले. डीएनए वेगळ्या होईपर्यंत गोठवलेले संग्रहित
डीएनए अलगावसाठी बुरशीची शुद्ध संस्कृती द्रव वाटाणा माध्यमामध्ये पिकविली गेली. बुरशीचे मायसेलियम द्रव माध्यमातून काढून टाकले गेले होते, फिल्टर पेपरवर वाळलेले, द्रव नायट्रोजनमध्ये गोठविलेले, होमोजीनाईझ्ड, सीटीएबी बफरमध्ये उष्मायन केलेले, क्लोरोफॉर्मने शुद्ध केले गेले, isopropanol आणि 0.5 M पोटॅशियम एसीटेटच्या मिश्रणाने अवतरित केले, 2% अल्कोहोलसह दोनदा धुतले. परिणामी डीएनए विआयनीकृत पाण्यात विरघळली गेली आणि –70 ° stored (कुतुझोवा एट अल., 20) वर साठवली गेली. कुबिट 2017. ((किआगेन, जर्मनी) वरील दुहेरी अडकलेल्या डीएनएसाठी एचएस डीएनए क्वांटिफिकेशन किटचा वापर करून डीएनए एकाग्रता मोजली गेली. अल्कोहोलयुक्त आणि गोठविलेले नमुने द्रव नायट्रोजनमध्ये ट्रायरेट केलेले होते, त्यानंतर डीएनए अलगाव नंतर वर वर्णन केल्यानुसार (शुद्ध बुरशीजन्य संस्कृतींच्या मायसेलियमसाठी).
सारणी 1. वापरलेल्या बुरशीच्या ताणांचे मूळ
मशरूम नाव | वनस्पती, अवयव | निवडण्याचे ठिकाण |
---|---|---|
कोलेटोट्रिचम कोकोड्स 1, सी. कोकोड 2, सी. कोकोड्स 3, इलियोनेक्ट्रिया क्रेसा, राइझोक्टोनिया सोलानी | बटाटा कंद | कोस्ट्रोमा प्रदेश, 1 ला शेतातील पिढीचे बटाटा कंद, किरणोत्सर्गी लाल स्कारलेट |
कोलेटोट्रिचम कोकोड्स 4 | बटाटा पाने | प्रतिनिधी मारी एल, योष्कर-ओला |
हेल्मिंथोस्पोरियम सोलानी | बटाटा कंद | मगदान प्रदेश, स्थिती तंबू, बटाटा कंद |
क्लेडोस्पोरियम फुलवम | टोमॅटोची पाने | मॉस्को प्रदेश, मोठ्या-फळयुक्त टोमॅटो |
अल्टरनेरिया टोमॅटोफिला | टोमॅटो फळ | ऑल-रशियन रिसर्च इन्स्टिट्यूट ऑफ प्लांट प्रोटेक्शनच्या मायकोलॉजी आणि फायटोपॅथोलॉजीच्या प्रयोगशाळेतील कर्मचार्यांच्या स्वाधीन |
फुसेरियम व्हर्टिसिलियम, फोमोप्सिफिसोली, अल्टेरानेरिया अल्टरनेटा, फेलिनस फेरुईनोव्ह्लूटीनस, स्टेम्फिलियम वेसिकेरियम, क्लेडोस्पोरियम क्लेडोस्पोरियोइड्स, rodक्रोडोन्टियम ल्युझुएली, पेनिसिलियम एसपी. | टोमॅटो फळ | क्रास्नोदर टेरिटरी, क्रिमस्की जिल्हा, ग्रेड क्रीम |
फुसेरियम ऑक्सिस्पोरम | गव्हाचे मूळ | मॉस्को प्रदेश |
पीसीआर डीटीप्रिम प्रवर्धक (डीएनए-तंत्रज्ञान) वर सादर केले गेले. पीसीआरसाठी, मूळ प्राइमर आणि ग्लिसरॉल ट्रायफॉस्फेट डिहायड्रोजनेस जनुकाच्या प्रजाती-विशिष्ट प्रदेशासाठी एक तपासणी वापरली गेली: फॉरवर्ड प्राइमर कोक 70 जीडीएफ –टीसीएटीएजीएटीटीसीटीटीसीटीसीसीजीजीसीए, रिव्हर्स प्राइमर कोक 280 जीडीआर - टीएसीटीटीजीएजीसीएटीजीजीजीटीटीजीजीटी 1). प्राइमर 213 बीपी प्रदेश वाढवतात.
प्रतिक्रियेमध्ये एकूण डीएनएची 50 एनजी (पाने आणि कंदांचे विश्लेषण करताना) आणि 10 एनजी (शुद्ध बुरशीजन्य संस्कृतींच्या डीएनएचे विश्लेषण करताना) झाली. प्रतिक्रिया मिश्रण (35 μl) एक पॅराफिन थराने दोन भागांमध्ये विभक्त केले होते: खालच्या (20 μl) मध्ये 2 × रिएक्शन बफरचे 10 μl (750 एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 8.8; 200 एमएम (एनएच 4) 2 एसओ 4; 25 मिमी एमजीसीएल 2; 0.1% दरम्यान- 20), प्रत्येक डीऑक्सिन्यूक्लियोटाइड ट्रायफॉस्फेटचे 0.5 एमएम, प्रत्येक प्राइमरचे 7 संध्याकाळ, आणि हायड्रोलायझेबल फ्लूरोसेंट प्रोबचे 4 संध्याकाळ; वरच्यामध्ये 1 × पीसीआर बफरचे 10 andl आणि टाक पॉलिमरेजचे 1 यू असते.
पॅराफिनसह मिश्रण वेगळे केल्याने नळ्या 5 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर जास्त काळ साठवल्या जातात आणि पीसीआरला 10 डिग्री सेल्सियसपेक्षा जास्त तापमानात 80 मिनिटे गरम केल्यावर गरम सुरुवात मिळू देते. पीसीआर खालील प्रोग्रामनुसार सादर केले गेले: 94.0 ° से - 90 एस (1 सायकल); 94.0 ° से - 30 से; 64.0 ° से - 15 से (5 चक्र); 94.0 ° से - 10 से; 64.0 ° से - 15 से (45 चक्र); 10.0 डिग्री सेल्सियस - स्टोरेज.
निकाल आणि चर्चा
ग्लिसरॉल ट्रायफॉस्फेट डिहायड्रोजनेज जनुकाचे अनुक्रम रशियाच्या वेगवेगळ्या प्रदेशात पाने, देठ, बटाटा कंद आणि टोमॅटो फळ (कुतुझोवा, 45) पासून विभक्त केलेल्या 2018 ताटांमध्ये निश्चित केले गेले. सर्व प्रकारच्या ताणलेल्या अभ्यासक्रमांचे अनुक्रम दोन न्यूक्लियोटाइड्समध्ये भिन्न असलेल्या दोन गटांमध्ये विभागले गेले. केवाय 2 आणि केवाय 496634 या दोन्ही गटांच्या प्रतिनिधींचे न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम जेनबँकमध्ये जमा आहेत.
त्यांच्या आधारावर डिझाइन केलेले प्राइमर coc70gdf, coc280gdr आणि cocgdz प्रोबॅक BLAST प्रोग्रामचा वापर करून तपासले गेले (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) ग्लिसरॉल ट्रायफॉस्फेट डिहायड्रोजनेज जनुकाच्या प्रजाती कॉलेटोट्रिचम आणि जीनबँक डेटाबेसमध्ये उपलब्ध असलेल्या इतर जीवांच्या सर्व अनुक्रमांवर.
इतर प्राण्यांचे डीएनए प्रदेश आढळले नाहीत जे प्राइमर आणि तपासणीसाठी अत्यंत समलिंगी आहेत.
सी कोकोड डीएनए, एन्थ्रॅकोनोझ संक्रमित बटाटा पानांचे डीएनए (२०१ 2017 मध्ये मारी एल, विविधता लाल स्कारलेट) मध्ये गोळा झालेल्या, आणि काळ्या स्पॉटने बाधित कंदांच्या सालाने (कोस्ट्रोमा प्रदेशात गोळा केलेल्या, नमुने वापरुन) चाचणी प्रणालीची संवेदनशीलता तपासली गेली. प्रकार रेड स्कारलेट, टेबल 2). कंद आणि बटाट्याच्या पानांमध्ये डीएनएच्या अस्तित्वाची पुष्टी करण्यासाठी सी. कोकोड स्ट्रॅन्स त्यामधून शुद्ध संस्कृतीत अलग ठेवण्यात आले.
चाचणी प्रणालीच्या संवेदनशीलतेच्या विश्लेषणाचा परिणाम दर्शवितो की पीसीआर मिश्रणाची एकूण सामग्री 0.05 एनजीपेक्षा जास्त असते तेव्हा नमुन्यात सी कोकोड डीएनएची उपस्थिती यशस्वीरित्या निदान करण्यासाठी वापरली जाऊ शकते. हे शोधण्यासाठी पुरेसे आहे, कारण एका स्क्लेरोटियामध्ये, सरासरी, 0.131 एनजी आणि एका बीजामध्ये जवळजवळ 0.04 एनजी डीएनए असतो (कुलेन एट अल., २००२). इंग्रजी समूहाने विकसित केलेली चाचणी प्रणाली (कुलेन एट., २००२) सारखीच संवेदनशीलता दर्शविते (०.०2002 एनजी डीएनए येथे उंबरठा सायकल and 2002 आणि ०.०34 एनजी वर 0.05 37).
सर्व प्रकरणांमध्ये सी. कोकोड्स असलेल्या नैसर्गिक नमुन्यांच्या विश्लेषणामुळे नमुना मध्ये त्याची उपस्थिती विश्वसनीयपणे प्रकट करणे शक्य झाले (टेबल 2). डीएनए अलगावसाठी प्रस्तावित पद्धत देखील नैसर्गिक वनस्पती नमुन्यांच्या विश्लेषणासाठी लागू होती.
तक्ता २. रिअल-टाइम पीसीआरसाठी कोलेटोट्रिचम कोकोड्स ओळखण्यासाठी प्रस्तावित चाचणी प्रणालीच्या संवेदनशीलतेचे निर्धारण
अवहेलना | नमुना *, एनजी मधील डीएनएचे प्रमाण | उंबरठा चक्र | सी. कोकोड शोध |
---|---|---|---|
मायसेलियम कोलेटोट्रिचम कोकोड | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
कंद फळाची साल 1 | 50 | 32 | + |
कंद फळाची साल 2 | 50 | 30 | + |
कंद फळाची साल 3 | 50 | 31.5 | + |
बटाटा पाने | 50 | 29.5 | + |
टीप. * पीसीआर उत्पादनांच्या मिश्रणामध्ये.
बुरशीच्या 15 प्रजातींमधून काढलेल्या डीएनए नमुन्यांवरील चाचणी प्रणालीची विशिष्टता तपासली गेली. प्रभावित आणि निरोगी फळे आणि टोमॅटो, बटाटा कंद यांच्या पानांपासून लेखकांनी बुरशीचे सर्व प्रकार वेगळे केले; गव्हाच्या मुळापासून एक ताण वेगळा होता (तक्ता 1). फळांच्या पृष्ठभागापासून विभक्त होणा species्या प्रजातींमध्ये अशी प्रजाती देखील आहेत जी टोमॅटोसाठी रोगकारक नसतात (उदाहरणार्थ, फेेलिनस फेरुईनोव्ह्ल्यूटीनस).
अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की सी. कोकोड डीएनए 20-27 च्या उंबरठा चक्रात आढळून आला आहे, तर इतर बुरशीजन्य प्रजाती आढळल्या नाहीत किंवा चक्र 40 नंतर सिग्नल दिली, ज्यास ठराविक ध्वनी प्रभावाचे श्रेय दिले जाऊ शकते (टेबल 3).
सारणी 3. विविध प्रकारच्या मशरूमसाठी चाचणी प्रणालीची चाचणी घेणे
मशरूम नाव | उंबरठा चक्र |
कोलेटोट्रिचम कोकोड 1 | 20.9 |
सी. कोकोड 2 | 22.6 |
सी. कोकोड 3 | 23 |
सी. कोकोड 4 | 22 |
फुसेरियम ऑक्सिस्पोरम | > 40 |
एफ व्हर्टिसिलियम | > 40 |
राईझोक्टोनिया सोलानी | > 40 |
फोमोप्सिस फेलोली | > 40 |
अल्टरनेरिया अल्टरनेटा | > 40 |
ए टोमॅटोफिला | > 40 |
हेल्मिंथोस्पोरियम सोलानी | > 40 |
फेलीनस फेरूइनोव्ह्लूटीनस | > 40 |
स्टेम्फिलियम वेसिकेरियम | > 40 |
आयलिओनेक्ट्रिया क्रेसा | > 40 |
क्लेडोस्पोरियम क्लेडोस्पोरिओइड्स | > 40 |
सी फुल्वम | > 40 |
अॅक्रोडोन्टियम लुझुलाए | > 40 |
पेनिसिलियम एसपी. | > 40 |
टीप. * सर्व नमुन्यांमधील डीएनएचे प्रमाण 10 एनजी होते.
टोमॅटोच्या पानांच्या नमुन्यांमध्ये सी कोकोड्स ओळखण्यासाठी विकसित चाचणी प्रणालीचा उपयोग नेक्रोट्रोफिक पॅथोजेन आणि बियाणे बटाटा कंद असलेल्या लक्षणांशिवाय दिसून आला. अभ्यासासाठी, आम्ही कोस्ट्रोमा, मॉस्को, कलुगा, निझनी नोव्हगोरोड या प्रदेशात पिकविलेल्या वेगवेगळ्या जातींचे बियाणे कंद घेतले. सी. कोकोड डीएनएची उपस्थिती नमुन्यांमध्ये महत्त्वपूर्ण मानली गेली, ज्याच्या विश्लेषणानुसार उंबरठा चक्र 35 पेक्षा जास्त नाही. हे उंबरलेले मूल्य 0.05 एनजी सी. कोकोड डीएनए (थ्रेशोल्ड सायकल 33.5, टेबल 2) च्या विश्वसनीय दृढनिश्चितीच्या आधारे निवडले गेले. 40 च्या वर उंबरठा चक्रांवर, इतर काही बुरशीजन्य प्रजातींचे डीएनए निदान झाले. या पध्दतीमुळे सी कोकोड डीएनएची महत्त्वपूर्ण उपस्थिती कोस्ट्रोमा, मॉस्को, कलुगा प्रांतात आणि क्रास्नोदर प्रदेशातील (टेबल्स 5, 4) एका टोमॅटोच्या पानात उगवलेल्या कंदांच्या 5 नमुन्यांमध्ये आढळली.
तक्ता potat. बटाटा कंदवरील कोलेटोट्रिचम कोकोड शोधणे *
नमुना क्रमांक | बटाटा वाण | वाढणारी जागा | सी. कोकोड शोध | उंबरठा चक्र |
---|---|---|---|---|
1 | लाल स्कार्लेट | कोस्ट्रोमा प्रदेश | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | सान्ते | मॉस्को प्रदेश | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | झुकोव्हस्की लवकर | मॉस्को प्रदेश | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | मौली | कलुगा प्रदेश | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | कल्पनारम्य | कलुगा प्रदेश | - | |
15 | गाला | निझनी नोव्हगोरोड प्रदेश. | - | |
16 | - |
टीप. * सर्व नमुन्यांमधील डीएनएचे प्रमाण 50 एनजी होते.
तक्ता 5. टोमॅटोच्या पानांवर कोलेटोट्रिचम कोकोड शोधणे *
नमुना क्रमांक | वाढणारी जागा | सी. कोकोड शोध | उंबरठा चक्र |
---|---|---|---|
1 | क्रास्नोडार टेरिटरी, क्रिमियन जिल्हा | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | क्रास्नोडार प्रदेश, येईस्क जिल्हा | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* सर्व नमुन्यांमधील डीएनएचे प्रमाण 50 एनजी होते.
आमच्याद्वारे तयार केलेली चाचणी प्रणाली संवेदनशीलता आणि विशिष्टतेमध्ये ब्रिटीश संशोधकांनी (कुलेन एट., २००२) विकसित केलेल्या निकृष्ट दर्जाची नाही आणि वनस्पती नमुन्यांच्या विश्लेषणासाठी उपयुक्त आहे. बियाणाच्या कंदांच्या विश्लेषणासाठी त्याच्या अनुप्रयोगामुळे कंदांमध्ये सी. कोकोड डीएनए ओळखणे शक्य झाले आणि बाह्य हानीच्या चिन्हे न होता आणि पानांच्या संसर्गाचे यशस्वीरित्या विश्लेषण करणे शक्य झाले.
आजपर्यंत रशियामध्ये सी. कोकोड्सच्या लागण झालेल्या बटाट्याच्या कंदांचे कोणतेही विश्लेषण केले गेले नाही. आमच्या पहिल्या अभ्यासानुसार असे दिसून आले आहे की रशियन फेडरेशनच्या वेगवेगळ्या प्रदेशात वाढलेल्या 16 चाचणी केलेल्या बियाण्या कंदांपैकी 5 मध्ये सी कोकोड असतात. हे दर्शविते की रशियातील बटाटा कंदांचा काळा डाग हा एक सामान्य बटाटा रोग आहे आणि बटाटा पिकाची मात्रा आणि गुणवत्ता कमी करण्याच्या भूमिकेस कमी लेखण्यात आले आहे.
टोमॅटोच्या पानांच्या विश्लेषणाने क्रांनोदर टेरिटरीच्या येईस्क जिल्ह्यातल्या एका पानात सी. कोकोड डीएनएची महत्त्वपूर्ण उपस्थिती दिसून आली. यापूर्वी, ब्रिटीश चाचणी प्रणालीचा वापर करून दक्षिण रशियामध्ये टोमॅटोच्या शेतांचे परीक्षण करताना (कुलेन एट., २००२) सी. कोकोड असलेली पाने आढळली आणि काही शेतात सी कोकोड्सने संक्रमित पानांचे प्रमाण जास्त आढळले (बेलोव एट अल., 2002). मॉस्को प्रदेश, क्रास्नोडार आणि प्रिमोर्स्की प्रदेशात, आम्हाला टोमॅटोची फळे मिळाली, ज्यामधून आम्ही सी कोकोड्सची शुद्ध संस्कृती वेगळी करण्यास व्यवस्थापित केले. हे शक्य आहे की सी. कोकोड्स आता मानल्या जाणा-या रशियामधील टोमॅटोवर अधिक व्यापक आहे आणि त्याची हानिकारकता देखील कमी लेखली जात नाही.
अशाप्रकारे, बटाटे आणि टोमॅटोवर सी कोकोडच्या व्यापक वितरणाबद्दल आजपर्यंत पुरेशी माहिती जमा झाली आहे.
बटाटा आणि टोमॅटो रोगांच्या विकासामध्ये या बुरशीची भूमिका चांगल्याप्रकारे समजण्यासाठी, रशियामध्ये त्याच्या प्रक्षेपणाचे परीक्षण करणे, माती आणि बियाण्यांच्या संसर्गाची भूमिका आणि स्टोरेज दरम्यान होणा-या नुकसानीत काळ्या डागाच्या भूमिकेचा अभ्यास करणे आवश्यक आहे. पीसीआर डायग्नोस्टिक्सच्या वापरामुळे हे काम लक्षणीयरीत्या सुलभ होऊ शकते आणि दोन्ही चाचणी प्रणालींचा एकाच वेळी वापर केल्यास विश्लेषणाची अचूकता लक्षणीय वाढेल.
या कार्यास रशियन विज्ञान फाउंडेशन क्रमांक 18-76-00009 च्या अनुदानाने पाठिंबा दर्शविला होता.
हा लेख "मायकोलॉजी अँड फाइटोपाथोलॉजी" जर्नलमध्ये प्रकाशित झाला होता (खंड 54, क्रमांक 1, 2020).